Laporan Biokimia Percobaan 1 IDENTIFIKASI KARBOHIDRAT

by Story Nadi - August 16, 2018

1. TUJUAN PERCOBAAN

Memahami metode identifikasi karbohidrat

2. PRINSIP PERCOBAAN

Uji Molisch : Kondensasi senyawa furfural dan turunannya dengan ɑ-naftol

Uji Benedict : Reduksi Cu²⁺ menjadi Cu⁺ oleh karbohidrat yang mengandung aldehid dan keton bebas

Uji Barfoed : Reduksi Cu²⁺ menjadi Cu⁺ oleh karbohidrat yang mengandung aldehid dan keton bebas

Uji Pati-Iodium : pembentukan kompleks pati-iodium

3. LANDASAN TEORI

Karbohidrat berasal dari pengertian atom karbon yang terhidrasi dengan rumus (CH2O)n. Tetapi pengertian ini sebenarnya sudah tidak tepat lagi karena banyak senyawa karbohidrat yang tidak mengandung atom hidrogen dan oksigen dengan perbandingan 2:1, misalnya gula deoksiribosa yang mempunyai rumus C₅H₁₀O₄. Disamping itu banyak pula karbohidrat yang mengandung atom lain seperti nitrogen, sulfur dan lain-lain yang menunjukkan tidak sesuainya dengan rumus karbohidrat tersebut. Walaupun demikian, nama karbohidrat ini sampai sekarang masih terus dipergunakan (Girindra, 1990).

Karbohidrat dapat dikelompokkan menurut jumlah unit monosakarida, ukuran dari rantai karbon, lokasi gugus karbonil (-C=O), serta stereokimia. Berdasarkan jumlah unit monosakarida dalam rantai, karbohidrat digolongkan menjadi 4 golongan utama yaitu:

a. Monosakarida (terdiri atas 1 unit gula)

Monosakarida adalah karbohidrat yang tidak dapat dihidrolisis menjadi senyawa yang lebih sederhana karena molekulnya hanya terdiri atas beberapa atom C. Monosakarida dibedakan menjadi aldosa dan ketosa. Contoh dari aldosa yaitu glukosa dan galaktosa dan contoh ketosa yaitu fruktosa. (Halimah, 2010)

b. Disakarida (terdiri atas 2 unit gula)

Disakarida adalah karbohidrat yang mengandung dua molekul monosakarida. Mempunyai formula umum C₁₂H₂₂O₁₁. Disakarida yang sangat penting adalah sukrosa, maltosa dan laktosa. Ikatan antara dua molekul monosakarida disebut ikatan glikosidik yang terbentuk dari gugus hidroksil dari atom C nomor 1 yang juga disebut karbon numerik dengan gugus hidroksil pada molekul gula yang lain. Ada tidaknya molekul gula yang bersifat reduktif tergantung dari ada tidaknya gugus hidroksil bebas yang reaktif yang terletak pada atom C nomor 1 sedangkan pada fruktosa terletak pada atom C nomor 2. Sukrosa tidak mempunyai gugus hidroksil yang reaktif karena kedua gugus reaktifnya sudah saling berikatan. Pada laktosa karena mempunyai gugus hidroksil bebas pada molekul glukosanya maka laktosa bersifat reduktif. (Halimah, 2010)

4 . ALAT DAN BAHAN

Alat	Bahan
Tabung Reaksi	Monosakarida:
Pipet tetes	Glukosa Arabinosa Galaktosa Fruktosa
Rak Tabung Reaksi
Gelas Ukur
Penangas air
	Disakarida:
	Sukrosa Maltosa Laktosa
	Polisakarida:
	Pati Selulosa
	Pereaksi Molisch
	Asam Sulfat Pekat
	Reagen Benedict
	Reagen Barfoed
	Pereaksi Seliwanoff
	HCl 6N
	NaOH 6N
	Larutan Iodium 0,01M

5. PROSEDUR KERJA

Uji Molisch

Sembilan tabung reaksi disiapkan, kedalamnya dimasukan 1mL larutan karbohidrat (monosakarida, disakarida, dan polisakarida). Selanjutnya, pada setiap tabung reaksi ditambahkan 3 tetes pereaksi Molisch, kemudian dikocok perlahan. Lalu, ditambahkan 1mL asam sulfat pekat melalui dinding dalam tabung yang dimiringkan. Kemudian diamati perubahan yang terjadi. Terjadinya warna pada bidang batas antara kedua lapisan cairan menunjukan reaksi positif.

Uji Benedict

Sembilan tabung reaksi disiapkan, kedalamnya dimasukan 3 tetes larutan karbohidrat (monosakarida, disakarida, dan polisakarida). Selanjutnya, ditambahkan 2ml reagen Benedict. Lalu, sembilan tabung reaksi tersebut disimpan di dalam penangas air mendidih selama 3 menit. Kemudian, dibiarkan dingin dan diperhatikan perubahan warna dan endapan (endapan hijau, kuning atau merah menunjukan reaksi positif).

Uji Barfoed

Sembilan tabung reaksi disiapkan, kedalamnya dimasukan 1mL larutan karbohidrat (monosakarida, disakarida, dan polisakarida). Kemudian, ditambahkan 1mL reagen Barfoed segar. Setelah itu, 9 tabung reaksi tersebut disimpan di dalam penangas air mendidih dan direbus selama 1 menit atau lebih. Jika perlu lebih lama lagi hingga reaksi reduksi terjadi. Kemudian, dibiarkan dingin pada air mengalir selama 2 menit.

Uji Pati-Iodium

Disiapkan 3 tabung reaksi, ditambahkan 1mL larutan pati 1% kedalam tabung reaksi. Kedalam tabung pertama ditambahkan 2 tetes air, tabung kedua ditambahkan 2 tetes 6N HCl, dan tabung 3 ditambahkan 2 tetes NaOH 6N. Kemudian, dicampur dan ditambahkan satu tetes 0,01M larutan iodium pada tiap tabung reaksi. Lalu, tabung dipanaskan hingga timbul warna dan dicatat perubahan warna yang terjadi. Setelah itu, diamati juga 3mL larutan glukosa yang ditambahkan satu tetes 0,01M larutan ioium.

6. DATA PENGAMATAN

No	Pengamatan	Keterangan
1	Uji Molisch Larutan karbohidrat sebelum ditambah pereaksi Molisch	Sebelum ditambah pereaksi Molish: Pada penambahan larutan karbohidrat pada 9 tabung reaksi, semua larutan berwarna bening.
1	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Molisch	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Molisch: Monosakarida: Larutan glukosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan arabinosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan galaktosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan fruktosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Disakarida: Larutan sukrosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan maltosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan laktosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu Polisakarida: Larutan pati + pereaksi Molisch = berwarna ungu Larutan selulosa + pereaksi Molisch = berwarna ungu
	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Molisch dan H₂SO₄ pekat	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Molisch dan H₂SO₄ pekat Monosakarida: Larutan glukosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄ pekat = berwarna ungu, terdapat endapan cokat muda Larutan arabinosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Larutan galaktosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄ pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Larutan fruktosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Disakarida: Larutan sukrosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Larutan maltosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan cokat muda Larutan laktosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Polisakarida: Larutan pati + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan coklat tua Larutan selulosa + pereaksi Molisch + H₂SO₄pekat = berwarna ungu, terdapat endapan cokat muda
2	Uji Benedict Larutan karbohidrat sebelum ditambah pereaksi Benedict	Sebelum ditambah pereaksi Benedict: Pada penambahan larutan karbohidrat pada 9 tabung reaksi, semua larutan berwarna bening.
2	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Benedict dan dipanaskan	Larutan karbohidrat setelah ditambah pereaksi Benedict dan dipanaskan Monosakarida: Larutan glukosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru kecoklatan, terdapat endapan berwarna orange Larutan arabinosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru kecoklatan, terdapat endapan berwarna orange Larutan galaktosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru kecoklatan, terdapat endapan berwarna orange Larutan fruktosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna merah orange, terdapat endapan merah orange Disakarida: Larutan sukrosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru, warna tidak berubah Larutan maltosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru kecoklatan, tidak ada endapan Larutan laktosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna orange tua, tidak ada endapan Polisakarida: Larutan pati + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru, warna tidak berubah Larutan selulosa + pereaksi Benedict + dipanaskan = berwarna biru, warna tidak berubah
3	Uji Barfoed Larutan karbohidrat sebelum ditambah pereaksi Barfoed	Sebelum ditambah pereaksi Barfoed: Pada penambahan larutan karbohidrat pada 9 tabung reaksi, semua larutan berwarna bening.
3

Tabel Identifikasi Karbohidrat

Tabung Uji	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Molisch	+	+	+	+	+	+	+	+	+
Benedict	+	+	+	+++	-	+	++	-	-
Barfoed	++	+	+	+++	-	-	-	-	-
Seliwanoff				+++	++
Pati-Iodium	-							Air: + HCl: + NaOH: -

Keterangan:

1: Glukosa 7: Laktosa

2: Arabinosa 8: Pati

3: Galaktosa 9: Selulosa

4: Fruktosa +: tedapat perubahan

5: Sukrosa -: tidak terdapat perubahan

6: Maltosa

7. PEMBAHASAN

Karbohidrat adalah polisakarida aldehid atau polisakarida keton atau senyawa hasil hidrolisis dari keduanya. Penyusun utama karbohidrat adalah karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O), dengan rumus umum C_nH_2nO_n. Karbohidrat memegang peranan penting dalam alam karena merupakan sumber energi utama bagi manusia dan hewan. karbohidrat juga memiliki fungsi biologi lainya bagi beberapa makhluk hidup tingkat rendah yaitu untuk menghasilkan energi. Karbohidrat dikelompokan menjadi empat kelompok penting yaitu monosakarida, disakarida, oligosakarida, dan polisakarida. Monosakarida merupakan karbohidrat yang tidak dapat dihidrolisis dan tidak kehilangan sifat gulanya. Disakarida merupakan karbohidrat bila dihidrolisis menghasilkan dua monosakarida yang sama atau berbeda. Oligosakarida merupakan karbohidrat yang bila dihidrolisis menghasilkan tiga sampai sepuluh monosakarida. Dan polisakarida merupakan polimer monosakarida yang memiliki bobot molekul yang tinggi, dan bila dihidrolisis menghasilkan lebih dari sepuluh monosakarida. Untuk mengidentifikasi karbohidrat, dapat dilakukan beberapa uji terhadap karbohidrat, seperti uji Molisch, Benedict, Barfoed, Seliwanoff, uji Pati-Iodium, dll.

Pada praktikum kali ini, pengidentifikasian karbohidrat dilakukan melalui analisis kualitatif terhadap keberadaan karbohidrat. Uji yang dilakukan adalah uji Molisch, Benedict, Barfoed, Seliwanoff, uji Pati-Iodium. Pada uji Molisch, karbohidrat yang dideteksi tidak spesifik karena uji Molisch merupakan uji umum untuk karbohidrat. Pereaksi yang digunakan yaitu pada uji Molisch yaitu pereaksi Molisch yang terdiri dari ɑ-naftol dalalam alkohol yang akan bereaksi dengan furfural membentuk senyawa kompleks berwarna ungu yang disebabkan oleh gaya dehidrasi asam sulfat pekat terhadap karbohidrat sehingga akan membentuk cincin berwarna ungu pada larutan karbohidrat (baik monosakarida, disakarida, maupun polisakarida). Hal ini menunjukan bahwa uji Molisch spesifik untuk membuktikan adanya karbohidrat tapi tidak spesifik untuk mengidentifikasi jenis karbohidrat. Reagen Molisch berfungsi untuk membentuk senyawa kompleks berwarna pada larutan karbohidrat yang diuji. Penambahan asam sulfat pekat pada tabung bertujuan untuk menghidrolisis ikatan pada karbohidrat agar menghasilkan senyawa furfural. Sehingga apabila asam sulfat yang diberikan berlebih, kemungkinan tidak dihasilkan reaksi positif ungu tetapi berwarna coklat sampai hitam, karena ikatan karbohidratnya telah rusak. Penambahan asam sulfat pekat dilakukan setelah penambahan reagen Molisch dilakukan agar eaksi berjalan baik yaitu ɑ-naftol sebagai indikator pewarna dengan terbentuknya senyawa kompleks berwarna ungu. Jika asam sulfat pekat terlebih dahulu dimasukan kedalam tabung maka tidak akan terlihat pembentukan senyawa kompleks karena reaksi ini berlangsung cepat. Larutan uji yang telah dicampurkan dengan pereaksi Molisch, ditambahkan larutan asam sulfat pekat dengan cara memiringkan tabung reaksi. Hal ini dilakukan untuk mempercepat terjadinya endapan berbentuk cincin dan perubahan warna menjadi warna ungu. Penambahan larutan asam sulfat pekat tidak dapat langsung ditambahkan kedalam larutan uji karena akan merusak larutan karbohidrat dan larutan uji tidak dapat membentuk cincin yang sempurna. Dalam uji Molisch, hasil reaksi positif menujukan bahwa larutan uji mengandung karbohidrat, ditandai dengan terdapatnya cincin ungu pada larutan uji. Sedangkan hasil reaksi negatif menunjukan uji tidak mengandung karbohidrat. Dalam hasil uji yang didapat yaitu semua larutan karbohidrat uji yang direaksikan dengan asam sulfat pekat membentuk dua lapisan larutan berwarna ungu dan terdapat cincin ungu pada larutan uji. Sesuai dengan prinsip uji Molisch Terbentuknya kompleks berwarna ungu terjadi karena pengaruh hasil kondensasi senyawa turunannya dengan ɑ-naftol.

Pengujian karbohidrat selanjutnya yaitu uji Barfoed. Uji Barfoed memiliki prinsip yang sama dengan uji Benedict yaitu mereduksi Cu₂⁺ menjadi Cu⁺ oleh karbohidrat yang mengandung aldehid san keton bebas. Uji Barfoed merupakan uji yang dapat membedakan karbohidrat monosakarida dan disakarida. Pada uji Barfoed, menggunakan reagen Barfoed yang ditambah dengan larutan karbohidrat (monosakarida, disakarida, dan polisakarida) menghasilkan larutan berwarna biru muda. Kemudian setelah dipanaskan dengan menggunakan penangas air. Larutan karbohidrat golongan disakarida dan polisakarida berwarna biru muda, sedangkan monosakarida menghasilkan larutan berwarna biru muda dan terdapat endapan berwarna merah. Hal ini diakibatkan karena pereaksi Barfoed bersifat asam lemah dan hanya direduksi oleh monosakarida dan disakarida. Pada uji ini, terdapat perbedaan kecepatan mereduksi antara monosakarida dan disakarida diakibatkan disakarida tersusun dari dua buah monosakarida sehingga membutuhkan waktu untuk mereduksi lebih lama. Pemanasan berfungsi untuk menghidrolisis disakarida sehingga bereaksi positif. Larutan monosakarida menjadi berwarna biru karena monomer gula bereaksi dengan fosfomolibdat membentuk senyawa biru dan endapan berwarna merah berasal dari larutan uji yang mengalami oksidasi dan mampu mereduksi senyawa yaitu melepaskan O₂ sehingga terbentuk tembaga oksida (CuO₂) atau gula pereduksi bereaksi dengan pereaksi dan menghasilkan endapan berwarna merah bata. Karbohidrat golongan disakarida sebenarnya dapat dihidrolisis sehingga bereaksi positif akan tetapi dibutuhkan waktu pemanasan yang lebih lama. Sehingga, untuk membedakan monosakarida, disakarida, dan polisakarida pada uji Barfoed tergantung berapa lama waktu pemanasannya, karena setelah dipanaskan monosakarida, disakarida, dan polisakarida tidak bereaksi secara bersamaan. Monosakarida dapat mereduksi lebih cepat daripada disakarida dan polisakarida serta disakarida yang membutuhkan waktu yang lama dalam pemanasan untuk dapat bereaksi. Sehingga percobaan ini sesuai dengan prinsip Uji Barfoed yang dapat membedaan antara monosakarida, disakarida, dan polisakarida berdasarkan lamanya larutan uji bereaksi (mereduksi Cu₂⁺menjadi Cu⁺.

8. DAFTAR PUSTAKA

Girindra, A. 1990. Biokimia 1. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.

Halimah. 2010. Biokimia. Bengkulu: Politeknik kesehatan.

Laporan Biokimia Percobaan 1 IDENTIFIKASI KARBOHIDRAT

0 comments

HELLO, THERE!

LET’S BE FRIENDS

PROMO POST

Labels

recent posts

Sponsor

Blog Archive

Laporan Biokimia Percobaan 1 IDENTIFIKASI KARBOHIDRAT

You May Also Like

0 comments

HELLO, THERE!

LET’S BE FRIENDS

PROMO POST

How To Look Good During Quarantine

Labels

recent posts

Sponsor

Blog Archive